锥形巴斯德移液器

在取卵培养过程中,培养技师需要使用许多器具,其中最重要的是名为巴斯德玻璃管的器具,从取卵到移植再到冷冻,始终要用到它。
巴斯德玻璃管是用于移动卵子等用途的器具,可将卵子与培养液一起吸入并吐出到另一个容器的培养液中。
根据用途,巴斯德玻璃管的粗细有几种不同,管头的粗细,粗的约为直径1mm,细的约为0.1mm(肉眼几乎看不见)。
虽然只是一个细玻璃管,但巴斯德玻璃管的质量不好会影响工作效率,因此非常重要。

使用方法:

①卵子的移动

卵子的移动

从卵巢中取出的卵子被包裹在一个称为颗粒膜细胞的细胞中,其大小约为数毫米。
用直径最大为1mm的玻璃器皿(帕斯特尔吸管)。

在显微受精或观察时,取出颗粒膜细胞,只处理卵子。
卵子的直径约为0.1mm,但有些非常小的卵子或极大的巨型卵。
因此,使用0.1mm~0.25mm左右的直径的玻璃器皿(先尖型帕斯特尔吸管)进行区分使用。

②卵裸化

卵裸化

取下颗粒膜细胞的工作称为裸化,俗称去皮。
在去皮的时候,先将其浸泡在酵素中,待颗粒膜细胞变得脆弱时移至培养液中,使用先细口移液管吸取或喷出液体。靠先细口移液管管壁的摩擦力,可以逐渐剥离颗粒膜细胞。
此时,根据颗粒膜细胞的剥离程度,逐渐使用更细的先细口移液管。

卵裸化

③卵子的冷冻

在卵子冷冻时,将卵子粘贴在宽度约为2mm的聚乙烯醇膜上,然后将其浸入液态氮中。
将少量培养液和卵一起放在聚乙烯醇膜上,但此时液体量越少越好,操作时间越短越好。
使用尽可能细的先细吸管是成功冷冻的关键。

卵子的冷冻

如果在各个步骤中不使用适当粗细的先细Pasteur移液管,将会出现各种问题。

卵子的冷冻

太粗会…
卵子可能会在移液管中不知去向
会带入过多的培养液
无法取下颗粒膜细胞
在冷冻时液量会过多

太细会…
卵子会堵塞移液管(造成变形、破损等)

市面上也有出售先细Pasteur移液管,但由于直径固定,无法进行微调。
我们的诊所使用的是由培养技师手工制作的一支一支移液管。

制作步骤:

1)将市售巴斯德玻璃眼滴管的前端2-3厘米处加热到燃烧酒精灯的火焰中。
2)当玻璃变软时,向左右两边拉伸(会形成图中所示的形状)。
※在这时,拉伸速度慢则制成较粗的,速度快则制成较细的。
但是,拉伸速度过慢则玻璃会溶解掉,速度过快则会断裂,需注意。

Pasteur移液管

Pasteur移液管

3)在需要的粗细位置割断。这时,割口必须是直的。有切口不整齐或斜的必须重新制作。
4)在显微镜下检查切口,按粗细分类完成后,烘干消毒后即可使用。