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〔住吉・银座〕冷冻保存

胚胎、囊胚、精子、卵子都可以放入液氮中冷冻保存。
一旦冷冻处理后在液氮中可以半永久地保持原有的状态,因此第一次体外受精时没能受孕或想要第二个孩子的时候可以融解冷冻胚胎再次进行移植。

做冷冻处理时如果细胞内生成冰晶,细胞会受到损伤以至死亡。为了在存活的状态下冷冻细胞使用冷冻保护剂。

 

【冷冻胚胎的三个步骤】

1.平衡 使冷冻保护剂渗透胚胎。
2.浓缩・脱水 使细胞内的水分脱离。
3.冷却 冷冻细胞

 

根据原理不同,冷冻手法分为缓慢冷冻法和超急速玻璃化保存法两种。

 

缓慢冷冻法 用冷冻保护剂渗透细胞,通过在细胞外生成冰晶使细胞脱水浓缩,再使用程序冷冻机以每分钟0.3度缓慢降温至零下30度。
超急速玻璃化
保存法
用冷冻保护剂渗透细胞后放入玻璃化溶液,约一分钟后细胞会脱水浓缩。在此状态下冷冻不会生成冰晶,可以在液氮中瞬间冷冻。

【胚胎、囊胚、卵子的超急速玻璃化保存法】

冷冻保护剂的渗透 水分被玻璃化溶液置换,细胞发生浓缩。(不会生成冰晶的状态) 把脱水浓缩后的胚胎放在冷冻薄膜上,然后放入液氮中

 

缓慢冷冻法使用机器操作,程序固定不变,不费劳力,但是机器不能根据每个胚胎的状态进行微调整,而且冷冻时的渗透压大,因此冷冻胚胎的存活率不是很高。相反,超急速玻璃化冷冻法虽然要求操作人员手法熟练,但胚胎几乎没有损伤,存活率接近100%。

 

本院由经验丰富的胚胎培养师采用超急速玻璃化保存法对胚胎、囊胚和卵子实施冷冻。

 

精子经过耐冻处理后,分注到小试管放入液氮中冷冻保存。

 

 

【参考】冷冻胚胎的融解

1.加温 融解冷冻胚胎。
2.稀释 把由冷冻保护剂脱水浓缩的细胞还原到原状态。
3.恢复培养 确认细胞是否还原到初始状态并重新开始发育。

液氮中冷冻保存的细胞在融解时如果加温时间太长,会因为去玻璃化使细胞内生成冰晶而损坏细胞,因此采用超急速加温法。

这种方法是通过把冷冻胚胎放入加热到37℃的融解液中,得到4300℃/分的超急速加温,防止冰晶的生成进而避免物理损伤。

用超急速加温法融解的胚胎细胞由于冷冻保护剂的浓缩作用处于收缩状态,利用溶液的渗透压差的扩散作用稀释去除冷冻保护剂使细胞恢复到初始状态。

胚胎的细胞膜很脆弱,耐不住细胞体积急剧增大膨胀,因此使用不会透过细胞膜的蔗糖作为渗透压缓冲剂逐步稀释。通过缓慢降低渗透压,防止细胞过度膨胀和细胞膜损伤,获得高存活率。

 

冷冻胚胎的融解

 

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